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         蛋白質分離純化的方法,要根據不同的處理物和目的蛋白而選擇不同的方法。所以在純化之前,應該要對目的蛋白一些理化性質等要加以了解。不過蛋白質純化最常用的是飽和硫酸銨法。本文主要介紹如何解決蛋白質分離純化過程中的蛋白質變性問題。

          蛋白質變性影響因素:

          1,一般溫度高于60攝氏度持續一段時間會變性。不同蛋白耐受高溫不同,具體問題具體分析。

          2,高濃度有機溶劑,如丙酮,乙醚,巰基乙醇等。

          3,含有蛋白酶環境會分解蛋白。

          4,變性劑,如高濃度鹽酸胍和尿素。

          5,鹽溶液,在一定濃度鹽作用下,會使蛋白中折疊在內部的疏水集團暴露而改變折疊結構。

          6,pH值變化,強酸強堿條件下會破壞蛋白質結構。等電點時蛋白質沉淀。

          因此,克服和避開上述內容可以減少變性。具體措施:

          1,控制溫度,pH值。避開強酸強堿和等電點。

          2,盡量減少和有機溶劑和變性劑的接觸。

          3,添加蛋白酶抑制劑,可以減少蛋白分解。

          4,鹽濃度適宜,不能太高。

          5,增加NMSF,N-馬來酰亞胺,去氧膽酸鈉等抗氧化物質,可以防止蛋白被氧化變性。

          掌握了蛋白質變性問題影響因素,避免這些問題,即可有效的防止在蛋白質分離純化過程中的蛋白質變性。


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